二、实验仪器及药品
(1)STE的配制(表3-1)
表3-1 STE(100mL)配方
试剂名称 |
试剂等级 |
用量 |
最终浓度 |
5mol/L NaCl |
分析纯 |
2mL |
0.1mol/L |
1mol/L Tris-HCl(pH8.0) |
分析纯 |
1mL |
10mmol/L |
0.5mol/L EDTA(pH8.0) |
分析纯 |
200μL |
1mmol/L |
dH2O |
不需灭菌 |
up to 100mL |
— |
在60mL dH2O中加入5mol/L NaCl 2mL、1mol/L Tris-HCl(pH8.0) 1mL和0.5mol/L EDTA(pH8.0) 200μL,混匀,加dH2O定容至100mL,1.034×105Pa高压蒸汽灭菌15min,备用。配制好的STE含有0.1mol/L NaCl,10mmol/L Tris-HCl和1mmol/L EDTA。
(2)溶液I的配制(表3-2)
表3-2 溶液I(100mL)配方
试剂名称 |
试剂等级 |
用量 |
最终浓度 |
葡萄糖 |
分析纯 |
0.9g |
50mmol/L |
1mol/L Tris-HCl(pH8.0) |
分析纯 |
2.5mL |
25mmol/L |
0.5mol/L EDTA(pH8.0) |
分析纯 |
2mL |
10mmol/L |
dH2O |
不需灭菌 |
up to 100mL |
— |
60mL dH2O中加入0.9g葡萄糖、1mol/L Tris-HCl(pH8.0) 2.5mL和0.5mol/L EDTA(pH8.0) 2mL,混匀,加dH2O定容至100mL,1.034×105Pa高压蒸汽灭菌15min,4℃贮存。配制好的溶液I含有50mmol/L葡萄糖,25mmol/L Tris-HCl和10mmol/L EDTA。
(3)溶液II的配制(表3-3)
溶液II中含有0.4mol/L NaOH和1% SDS,该试剂需要新鲜配制,配制后将NaOH和SDS按1:1的比例混合。
表3-3 溶液II(1mL)配方
试剂名称 |
试剂等级 |
用量 |
最终浓度 |
5mol/L NaOH |
分析纯 |
40μL |
0.4mol/L |
dH2O |
不需灭菌 |
up to 500μL |
— |
2%SDS |
分析纯 |
500μL |
1% |
dH2O |
不需灭菌 |
up to 500μL |
— |
(4)溶液III的配制(表3-4)
表3-4 溶液III的配制(100mL)
药品名称 |
用量 |
5mol/L KAc |
60mL |
冰醋酸 |
11.5mL |
dH2O |
28.5mL |
配制好的溶液III含3mol/L KAc、5mol/L冰醋酸(pH4.8)。
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