五、注意事项    

    1.纯化回收DNA片段可以直接从液体中回收，也可以经琼脂糖凝胶电泳后切胶回收。切胶时尽量迅速准确，避免紫外线灯下操作时间，以免片段发生断裂。
    2.连接时，将反应溶液加入到反应管整个过程应该在冰盒上操作。将酶从冰箱中取出放在冰盒或装有碎冰的容器中，确保试管深入冰中而非只在冰的表面。在准备过程中酶不可以从冰中移开，使用完毕立即放回冰箱。
    3.基因工程操作是微量操作，试剂昂贵，要细心，准确地配制所用的试剂。DNA样品和酶用量体积都很少，要注意吸样量的准确性，酶用量不能过多，因酶通常保存在一定浓度的甘油内，酶用量取得过多，甘油浓度加大反而抑制酶的反应，通常不应超过1/10酶反应总体积。当塑料小管在一定温度下水浴进行酶反应时，盖子必须盖得严密，防止水气出入，影响总体积。要注意酶反应时，加样顺序，最后加酶液，混匀，操作过程中，一旦吸取好酶溶液，酶应立即放回-20℃冰箱中，防止酶失活。
    4.制作感受态细胞所需大肠杆菌应处于对数生长期。提前-20℃预冷离心管及0.1mol/L caCl2溶液，注意0.1mol/L caCl2溶液在低温条件下极易凝固，掌握好预冷时间以免耽误实验进程。次日分装感受态细胞后先至于-20℃保存1-2h预冷再转入-70℃长久保存。